说到天然产物,一般指的是存在于自然界陆生动植、海洋生物及微体内的各类物质成分,其中又以植物体种类多、分布广及易获取而更多的作为研究对象,传承数千年的祖国传统医学通过对药用植物的炮制和煎煮等方法来获取安全、有效的活性物质,随着近现代科学技术和理论的发展,植物中的物质成分秘密逐渐被人们揭开,这其中起着关键作用的一步便是现代化提取分离手段。针对天然产物的不同特性,不同机理的分离技术像水蒸汽蒸馏和有机溶剂萃取等较为常用,但同时也存在操作不便、费时费力、萃取率不高和环境负担等缺点。超临界CO2流体因无毒、环保、化学惰性、渗透性高、传质阻力小、极性类似正己烷和可通过改性剂调整极性、密度和黏度易控制等原因被作为萃取和色谱分离手段而适用于天然产物分析,并带给使用者“超”乎想象的应用体验。
五味子药材中的木质素分析
中药五味子(Schisandra chinensis)为常用的滋补强壮类药材,其中含有的联苯环辛烯型木脂素是其药理作用的主要活性物质。结构差异导致不同类型和程度的生物活性是学者们研究的关注方向,因此木脂素的分离分析是五味子药材研究中的重要领域。《中国药典(2015版)》五味子项下记录的分析方法为样品用甲醇超声提取后使用HPLC分析。Nexera UC使用超临界二氧化碳作为萃取和分离方法,同HPLC方法相比,在前处理方式和分析中具有提取时间短、处理简便、分 析速度快和分离度高等显著优势。
同一样品的分析,SFC的分析时长不足原HPLC分析方法的1/5,且分离度明显优于原HPLC方法;重复性分析结果表明,系统具有优良的稳定性。
重复性分析结果(RSD%,n=5)
LQC:五味子甲素、五味子乙素、五味子醇乙、五味子素和五味子酯甲浓度为3.13 mg/L,五味子丙素为4.69mg/L;
MQC:五味子甲素、五味子乙素、五味子醇乙、五味子素和五味子酯甲浓度为25 mg/L,五味子丙素为37.5mg/L;
HQC:五味子甲素、五味子乙素、五味子醇乙、五味子素和五味子酯甲浓度为100 mg/L,五味子丙素为150 mg/L;
快速高效、分离良好、稳定可靠的SFC方法可为中药五味子中木脂素研究和质量控制的分析方法提供参考,另外可对天然产物中有效成分的SFC分析方法建立提供借鉴。
木瓜中齐墩果酸和熊果酸分析
木瓜为蔷薇科木瓜属植物贴梗海棠的果实,具食用、药用、观赏多种用途,为传统中药,临床应用广泛。齐墩果酸和熊果酸是木瓜的主要药效成分,具有抗癌、提高免疫力、降血脂和降血糖等功效。齐墩果酸和熊果酸为同分异构的五环三萜酸,性质极为相似,使用常规液相分离时,分析时间长且分离度较低。
Nexera UC Online SFE–SFC系统有效的将SFE和SFC实现了在线联用,简化和统一了前处理手段。本实验使用该系统开发了木瓜中齐墩果酸和熊果酸的分析方法,同药典方法相比,该法前处理简单,所需样品量少,方法稳定可靠,分离度高,绿色环保。Online SFE-SFC-UV系统在中药材有效成分含量测定领域具有广阔的应用前景。
Online-SFE-SFC系统流路图<
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本例中,4 min静态SFE和3 min动态SFE为前处理过程,前处理结束后,提取物直接注入到联用的SFC中进行分析,单个样品共计时长为30 min。而对比药典方法中除去前处理耗时不计,分析时长也超过了1 h。另外超临界流体具有的高扩散和高渗透性能使得色谱峰的峰形得到极大改善,灵敏度得到提高。
常规液相药典方法分离色谱图
该方法实现样品前处理(SFE)和样品分析(SFC)在线联用,简化了前处理操作。具有快速、稳定、所需样品量少、绿色环保等优点。Online SFE-SFC-UV系统在中药材有效成分含量测定领域具有广阔的应用前景。
香草兰豆荚中香草醛等化合物的分析
香草兰为兰科攀缘藤本植物,原产墨西哥。其豆荚经过加工后的产品香气独特,留香时间长,具有用途广、经济价值高的特点,被广泛应用于高档食品、化妆品、饮料、医药等领域。
香草醛是香草兰豆荚中含量最高的香气物质,对整体香气有高达1/3的贡献率。此外,有资料表明香草酸、对羟基苯甲醛和对羟基苯甲酸3种物质的含量也是衡量整体香气品质的重要指标。香草兰豆荚传统提取处理方法为乙醇溶剂法,主要有超声法和浸泡法,该方法不仅需要用到大量的溶剂,且耗时较长。在本实验中采用Nexera UC Offline-SFE系统,以超临界二氧化碳流体作为溶剂进行萃取并收集萃取液,GCMS-QP2020进样定量分析。该萃取方法具有萃取效率高、重复性好、节省溶剂和操作时间、自动化程度高等特点。
利用Offline-SFE系统萃取香草兰豆荚中香草醛、对羟基苯甲醛、香草酸、对羟基苯甲酸四种物质萃取速度快、萃取效率高、操作简便、绿色环保,与GCMS联用可实现香草兰豆荚中香草醛等物质的快速检测。
欲知详情,请参见《超临界流体萃取/超临界流体色谱应用文集》