1、筛选过程中的“瞄准镜”
LC-MS/MS技术在大分子定量分析中的优势吸引了众多分析研究者的注意力。但是快速建立高效稳定LC-MS/MS方法依旧是蛋白生物分析的挑战。胰酶酶解是该方法中必不可少的前处理手段。胰酶像剪刀将形色各异的蛋白分子剪成条条片断,绝大多数片断氨基酸组成都是相似的,方法开发中费尽心思筛选的“特征肽段”往往是少量的差异性片断。
更快、更准地寻找“特征肽段”不仅依赖分析者的经验,更需要工具软件的辅助。作为“瞄准镜”的Skyline软件与超快速液相色谱-质谱联用平台集成一体,简化了“特征肽段”的筛选过程。Skyline软件帮助我们设计、优化多重反应监测(MRM)的串联质谱定量方法,不仅将结果和方法优化结合起来,也为定量蛋白质组学的研究工作提供了标准化的工作流程。
Skyline软件标准化工作流程
2、撬动抗体药物生物分析的支点——nSMOL技术
血浆、血清中目标抗体药物若采用传统方式或Pellet酶解方式,获得的酶解产物是多种肽段的混合。针对如此数量庞大的待选肽段群进行方法开发和验证将会消耗分析者大量的时间和精力。抗体药物特殊的结构让我们可以设计实验巧妙地酶解关键的Fab区域,缩小待选肽段的范围。通过纳米表面限制性酶解抗体药物实现Fab区域的选择性酶解技术(nSMOL)处理抗体,尽可能降低对非特异性区域例如保守区域的酶解,从而极大地减少酶解肽段的数量,让分析者能够在更短的时间内实现生物基质中抗体药物更高灵敏的分析。nSMOL技术使得高通量、高灵敏度抗体药物生物分析成为可能,目前岛津应用团队已经成功开发了血浆中曲妥珠、贝伐单抗、利妥昔、西妥昔等单抗定量分析方法。
3、肽段筛选结果案例展示
筛选出的80%肽段与曲妥珠单抗Fab区域相关,表明nSMOL前处理技术具有高选择性酶解能力,极大缩小待选肽段的范围,降低LC-MS/MS分析过程的复杂程度。
红色和蓝色表示检测到的Fab区域多肽,浅黄色表示检测到的Fc区域多肽