津津老师，最近我们企业QC实验室在做赤芍配方颗粒特征图谱检测，但是国家标准提供的方法是常规液相色谱方法，没有提供超高效液相色谱方法条件，我们这个品种临床使用量大，批次多，有什么方法可以快速生成超高效液相色谱分析条件？

配方颗粒特征图谱在执行分析时，标准原文均提到参照“中国药典2020年版通则0512高效液相色谱法”，现行药典已经明确方法条件不再是唯一条件，按照通则要求进行方法转换即可哈。

哦哦，之前我们都是完全参照原文条件执行，没有做过调整，不知道怎么操作及方法转换的具体流程和要求。

不用担心哈，这期我会给大家分享利器，即方法转换计工具，分享具体操作流程哈。

2015版与2020版药典中“色谱参数调整”比较

2015年版《中国药典》0512通则规定：品种正文项下规定的色谱条件（参数），除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等可适当调整。

2015年药典0512版通则仅提到方法调整的参数项目，许多客户在实际执行时担心掌握不好偏离范围而对方法微调持谨慎态度，2020版药典首次全面增订“色谱参数允许调整的范围”，品种项下条件不再是固定的，本次增订内容提供了“使用不同粒径、内径色谱柱的液相色谱方法转换的操作准则”，用户可依据通则进行HPLC法向UHPLC法转换，可有效较少单针分析时间，提高分析通量，减少仪器用电耗能、人工成本、废液处理成本、试剂成本。

色谱参数调整后的要求简析

? 改变色谱柱填充剂粒径和柱长后，L/dP值（或N值）应在原有数值的-25%~+50%。

注意事项：在换算L/dP值时，参数单位需要保持一致。

? 调整后，系统适用性应符合要求，且色谱峰出峰顺序不变。

解读：在调整后首先需要进行系统适用性重新确认，除药典提到出峰顺序不变之外，同时按照《中国药典分析检测技术指南》，色谱峰出峰个数应保持一致。

? 应评价色谱参数调整对分离和检测的影响，必要时对调整色谱参数后的方法进行确认。若调整超出表中规定的范围或品种项下规定的范围，被认为是对方法的修改，需要进行充分的方法学验证。

解读：对于中药指纹图谱、特征图谱方法学验证，可参照《国家药品标准工作手册》执行，需要对精密度和耐用性进行验证。对于其他项目，可参照《9101分析方法验证指导原则》、《中国药典分析检测技术指南》进行验证。

? 当对调整色谱条件后的测定结果产生异议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。

岛津方法转换应对方案

0512通则提到可通过相关软件计算表中流速、进样体积和梯度洗脱程序的调整范围，并根据色谱峰分离情况进行微调。面对标准变化和用户需求，岛津提供“方法转换工具”、超高效液相色谱仪、色谱柱整体解决方案助力用户应对方法转换。

岛津方法转换工具特点

? 中文界面，操作简便

? 支持独立运行和集成进入LabSolutions工作站操作，该功能可兼容不同的岛津机型

? 方法转换工具可实现梯度开始时间或梯度程序的调节，工作站集成版本使用移动仪器参数功能无需更换流路和混合器等部件就可以实现快速便捷的分析方法转换，自动生成方法转换后的分析条件参数

? 计算器内置ChP（中国药典）和USP（美国药典）计算公式，自动计算流速、进样体积、梯度洗脱程序

? 内置混合器体积、进样体积、死体积及检测池体积选择项目，方便用户进行系统匹配

? 借助压力预测，可为仪器选型和色谱柱规格选择提供参考

使用方法

? 分别输入当前HPLC使用色谱柱和计划转换后UHPLC使用色谱柱规格（含柱长、内径、粒径信息）

? 左侧输入转换前HPLC色谱方法条件，软件自动计算转换后条件数值

? 左侧梯度表输入当前HPLC梯度程序，右侧即会自动转换为UHPLC梯度

使用注意事项

? 为获得良好方法转换效果及高匹配色谱图表现，须使用同一品牌同一系列（如SGLC的Shim-pack系列）或者性能相近的色谱柱，相同填充剂材质（硅胶或聚合物）、保护基团、键合相（C 18或其他）。

? 对于梯度分析， 系统延迟体积对于分析影响较大，需要注意HPLC和UHPLC使用仪器混合器体积差异，并在软件设置模块输入相应参数。

不同LC平台选择和对应色谱柱选择

岛津多系列HPLC可以满足用户不同分析需求，选择和 LC 液相系统更为匹配的色谱柱可以获得更高的分离效率，如下表格总结了针对不同的液相系统配置如何选择色谱柱。

赤芍（芍药）配方颗粒方法转换实例

从HPLC转为UHPLC法，L/dP保持一致，符合“色谱参数调整范围”要求。

HPLC法转换为UHPLC法后，特征峰的出峰顺序和个数与原HPLC法保持一致，满足药典要求。特征峰与相邻色谱峰均达到基线分离，满足《中药配方颗粒国家标准申报资料目录及要求》规定。

HPLC转换为UHPLC法后，各溶液中芍药苷的理论塔板数均远大于3000，符合标准规定。

取对照药材参照物溶液连续进样6次，考察仪器精密度。8个特征峰的保留时间和峰面积RSD值分别在0.026%~0.235%和0.272%~0.982%，仪器精密度良好。

采用岛津Multi-Data Report功能对赤芍配方颗粒特征图谱分析结果进行快速评价，结果显示：HPLC法转换为UHPLC法后，特征峰3、6、7、8的相对保留时间及峰7、8的相对峰面积均符合标准规定，与HPLC法特征图谱分析结论一致。

综上所述，采用MT方法转换计算器进行赤芍配方颗粒HPLC法与UHPLC互相转换，该功能无需经过繁琐的计算即可一键进行方法的快速转换。HPLC法转为UHPLC法后，特征图谱分析时间由原来的60min缩短至16.95min，分析效率明显提高，且方法专属性、系统适用性及待测样品的分析结果均符合标准的规定。