大家在使用反相色谱时遇到过这样的现象吗？
样品溶液采用甲醇溶剂时，进样体积增加，分离度变差。
标准溶液（甲醇）和被测样溶液（水提取液）进样体积相同，标准溶液的色谱峰明显变宽。
往往我们会为这样的现象而困扰，究竟什么原因导致这些现象，会怀疑是不是分析方法或仪器设备出了问题。真相究竟是不是这样呢？
首先，我们来看一张图，描述的是样品溶剂和进样体积的改变对咖啡因理论塔板数（N）的影响趋势。
图上我们可以看到样品溶剂采用100%甲醇时， 10 μL进样体积以上理论塔板数就显著下降了，此时会产生“伸舌峰”，而进样体积进一步增大到100 μL时会在死时间洗脱，理论塔板数降至100以下。
样品溶剂竟然会影响分离效果，各位看官一定不曾预料到吧。其实在分析过程中，样品溶剂也会成为流动相的一部分，尤其在进样体积增加时，若采用甲醇作为样品溶剂，相对于流动相洗脱力强，目标组分随甲醇移动加快。如果样品溶剂采用水溶液，由于样品溶剂相对于流动相洗脱能力弱，目标组分在色谱柱头浓缩后再进行分离，即使增加进样量，理论塔板数也不会下降，反而您会惊喜发现稍有上升的倾向，同时保留时间也略有延迟。
各位看官在新方法开发时，如果进样量比较大，样品溶剂的种类可是会影响峰形和保留时间，务必注意哦！