UHPLC法分析带保护基团的亚磷酰胺单体
SGLC-LC-391
摘要:本文建立了带保护基团的亚磷酰胺单体N-苯甲酰基-5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-甲基腺苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)的UHPLC测定方法。采用色谱柱Shim-pack Scepter HD-C18、ShimNex UP C18分析此亚磷酰胺单体,结果显示,此亚磷酰胺单体的两个手性同分异构体色谱峰峰型良好,且2个化合物分离度大于1.5,满足分析要求。此方法可为带保护基的亚磷酰胺单体检测提供参考。
关键词:带保护基的亚磷酰胺单体 Shim-pack Scepter HD-C18 ShimNex UP C18 UHPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-40BX3高效液相色谱仪;
色谱柱:ShimNex UP C18(1.8μm,2.1×100mm;P/N:380-01231-02);
色谱柱:Shim-pack Scepter HD-C18(1.9μm,2.1×100mm;P/N:227-31026-05);
纯水机:PR-FP-0120α-MT1(+ 60L水箱 + 取水器);
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341);
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 分析条件及实验结果
1.2.1 分析条件
色谱柱:ShimNex UP C18(1.8μm,2.1×100mm;P/N:380-01231-02)
柱温:17℃
检测波长:235nm
流速:0.3 mL/min
进样量:1 µL
流动相:A:10mM乙酸铵,B:乙腈;A:B=35:65
实验结果
按照上述色谱条件(1.2.1)进行采集,对照品溶液如下:
对照品溶液
1.2.2 分析条件
色谱柱:Shim-pack Scepter HD-C18(1.9μm,2.1×100mm;P/N:227-31026-05)
柱温:20℃
检测波长:235nm
流速:0.3 mL/min
进样量:1 µL
流动相:A:10mM乙酸铵(用氨水调节pH为9.0):乙腈=50:50;B:10mM乙酸铵(用氨水调节pH为9.0):乙腈=5:95
A:B=70:30
实验结果
按照上述色谱条件(1.2.2)进行采集,对照品溶液如下:
对照品溶液
3. 结论
本文建立了带有保护基团的亚磷酰胺单体N-苯甲酰基-5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-甲基腺苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)的UHPLC测定方法。采用色谱柱Shim-pack Scepter HD-C18、ShimNex UP C18分析此亚磷酰胺单体,结果显示,此亚磷酰胺单体的两个手性同分异构体色谱峰峰型良好,且2个化合物分离度大于1.5,满足分析要求。此方法可为带保护基的亚磷酰胺单体检测提供参考。