小柴胡颗粒中黄芩提取物检查项补充检验方法
SGLC-LC-384
摘要:本文建立了小柴胡颗粒中黄芩提取物补充检验的HPLC测定方法。参照小柴胡颗粒中黄芩提取物检查项补充检验方法(BJY 202304)色谱条件,采用色谱柱Shim-packVeloxC18分析,结果显示供试品色谱中呈现与对照药材参照物中5个主要特征峰保留时间相对应的色谱峰,其中峰1与峰4与对照品参照物峰保留时间一致。理论板数按黄芩苷峰计算远大于5000,各特征峰峰形和分离度良好,满足检测要求。此方法可为小柴胡颗粒中黄芩提取物的检测提供参考。
关键词:小柴胡 黄芩提取物 补充检验方法 Shim-pack Velox C18 HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪;
色谱柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,4.6×100mm;P/N:227-32011-03);
纯水机:PR-FP-0120α-MT1(+ 60L水箱 + 取水器);
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341);
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 参照物溶液的制备
取黄芩对照药材0.1g,加水煎煮1.5小时,滤过,滤液浓缩至近干,加入50%乙醇溶液25 mL,密塞,超声处理(功率350W,频率37kHz)45分钟,取出,放冷,摇匀,滤过,滤液用0.22μm微孔滤膜滤过,作为对照药材参照物溶液。另取黄芩苷对照品和汉黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1mL各含60µg的混合对照品溶液,摇匀,用0.22μm微孔滤膜滤过,作为对照品参照物溶液。
1.3 供试品溶液的制备
取本品,混匀,研细,取1g(相当于含黄芩生药量0.056g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇溶液25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率350W,频率37kHz)45分钟,取出,放冷,再称定重量,用50%乙醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用0.22 μm微孔滤膜滤过,即得。
1.4 分析条件
色谱柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,4.6×100 mm;P/N:227-32011-03)
柱温:20℃
检测波长:270 nm
流速:0.6mL/min
进样量:5µL
流动相:A:0.5%甲酸;B:甲醇
梯度程序如下:
2. 实验结果
按照上述色谱条件(1.4)进行采集,参照物溶液和供试品色谱图如下:
对照品参照物溶液
对照药材参照物溶液
供试品溶液
重现性
对照药材参照物溶液重现性
供试品溶液重现性
3. 结论
本文建立了小柴胡颗粒中黄芩提取物的HPLC测定方法。参照小柴胡颗粒中黄芩提取物检查项补充检验方法(BJY 202304)色谱条件,采用色谱柱Shim-pack Velox C18分析,结果显示供试品色谱中呈现与对照药材参照物中5个主要特征峰保留时间相对应的色谱峰,其中峰1与峰4与对照品参照物峰保留时间一致。理论板数按黄芩苷峰计算远大于5000,各特征峰峰形和分离度良好,满足检测要求。此方法可为小柴胡颗粒中黄芩提取物的检测提供参考。