摘要:本文建立了桔梗中桔梗皂苷D的HPLC测定方法。参照2020版《中国药典》色谱条件,采用色谱柱ShimNex CS C18和ShimNex WR C18分析桔梗中桔梗皂苷D,结果显示,桔梗皂苷D峰形对称,理论塔板数大于3000,桔梗皂苷D与相邻杂质峰基线分离,满足《中国药典》要求。此方法可为桔梗中桔梗皂苷D的检测提供参考。
关键词:桔梗 桔梗皂苷D ShimNex CS C18 ShimNex WR C18 HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪;
纯水机:PR-FP-0120α-MT1(+ 60L水箱+取水器);
色谱柱:ShimNex CS C18(5 μm,4.6×250 mm;P/N:380-01230-01);
色谱柱:ShimNex WR C18(5 μm,4.6×250mm;P/N:380-01230-22);
纯水机:PR-FP-0120α-MT1(+ 60L水箱 + 取水器);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 对照品溶液的制备
取桔梗皂苷D对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,即得。
1.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过二号筛)约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率250W ,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣加水20mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用氨试液50 mL洗涤,弃去氨液,再用正丁醇饱和的水50mL洗涤,弃去水液,正丁醇液回收溶剂至干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
1.4 分析条件
柱温:30℃
检测器:ELSD-LTⅢ蒸发光散射检测仪
漂移管温度:60℃
流速:1.0 mL/min
进样量:10 µL
流动相:乙腈:水=25:75
1.5 实验结果
1.5.1 色谱柱:ShimNex WR C18(5 μm,4.6×250mm;P/N:380-01230-22)
按照上述色谱条件(1.4)进行采集,对照品溶液和供试品色谱图如下:
对照品溶液
供试品溶液
重现性
对照品溶液重现性
供试品溶液重现性
1.5.2 色谱柱:ShimNex CS C18(5 μm,4.6×250mm;P/N:380-01230-01)
按照上述色谱条件(1.4)进行采集,对照品溶液和供试品色谱图如下:
对照品溶液
供试品溶液
重现性
对照品溶液重现性
供试品溶液重现性
3. 结论
本文建立了桔梗中桔梗皂苷D的HPLC测定方法。参照2020版《中国药典》色谱条件,采用色谱柱ShimNexCSC18和ShimNex WR C18分析桔梗中桔梗皂苷D,结果显示,桔梗皂苷D峰形对称,理论塔板数大于3000,桔梗皂苷D与相邻杂质峰基线分离,满足《中国药典》要求。此方法可为桔梗中桔梗皂苷D的检测提供参考。