摘要：本文建立了化妆品中对苯二胺等 32 种组分的HPLC测定方法。参照国家药品监督管理局2021年第17号通告《化妆品安全技术规范（2015版）》新增修订版中对苯二胺等 32 种组分检验方法中色谱条件2（分为2组，分别检测），并对色谱条件进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18分析对苯二胺等32种组分，32个化合物峰形良好，分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为化妆品中对苯二胺等 32 种组分的HPLC分析提供参考。
关键词：对苯二胺 化妆品 ShimNex CS C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪（第一组）；
Shimadzu LC-2030高效液相色谱仪（第二组）；
色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×250 mm，5 μm；P/N：380-01230-01)；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合标准溶液的制备

1.2.1 标准储备溶液的配制：

称取各染料对照品 0.1 g（精确到 0.0001 g），分别置10 mL容量瓶中，以2 g/L亚硫酸氢钠水溶液和无水乙醇（1:1）的混合溶液溶解并定容至10 mL，制成浓度约为10 g/L的各染料标准储备溶液。以下染料在上述溶剂中的溶解性较差，可分别采取如下措施：甲苯-2,5-二胺硫酸盐和2-氯对苯二胺硫酸盐2种组分直接用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容；甲苯-3,4-二胺直接用无水乙醇定容；2-硝基对苯二胺和4-硝基邻苯二胺需将称样量减至25 mg（精确到0.00001 g），再用无水乙醇定容，配成约2.5 g/L的溶液。

1.2.2 混合标准工作溶液的配制：

参照色谱条件2项下的要求，对32种染料成分进行分组，并根据分组情况，取标准储备溶液（1.2.1）适量于10 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，配制成浓度为500 mg/L的混合标准工作溶液。临用现配。

1.3 分析条件

1.3.1 分析条件（第一组）

色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×250 mm，5 μm；P/N：380-01230-01)
柱温：25℃
检测波长：280 nm
流速：1.2 mL/min
进样量：5 µL
流动相： A：20 mmol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调pH至7.5） B：甲醇 C：乙腈

1.3.1 分析条件（第二组）

色谱柱：ShimNex CS C18 (4.6×250 mm，5 μm；P/N：380-01230-01)
柱温：25℃
检测波长：280 nm
流速：1.0 mL/min
进样量：5 µL
流动相： A：20 mmol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调pH至7.5） B：甲醇

2. 实验结果

按照上述色谱条件（1.3.1）进行采集，第一组混合标准工作溶液色谱图如下：

混合标准工作溶液（第一组）

按照上述色谱条件（1.3.2）进行采集，第二组混合标准工作溶液色谱图如下：

混合标准工作溶液（第二组）

重现性

混合标准溶液（第一组）重现性

混合标准溶液（第二组）重现性

3. 结论

本文建立了化妆品中对苯二胺等 32 种组分的HPLC测定方法。参照国家药品监督管理局2021年第17号通告《化妆品安全技术规范（2015版）》新增修订版中对苯二胺等 32 种组分检验方法中色谱条件2（分为2组，分别检测），并对色谱条件进行优化，采用色谱柱ShimNex CS C18分析对苯二胺等32种组分，32个化合物峰形良好，分离度大于1.5，满足日常检测需求。此方法可为化妆品中对苯二胺等 32 种组分的HPLC分析提供参考。