摘要：本文建立了食品（婴幼儿配方奶粉）中烟酸和烟酰胺的HPLC测定方法。参照GB 5009.89-2016第二法的色谱条件，采用色谱柱Shim-pack GIST C18-AQ分析食品（婴幼儿配方奶粉）中烟酸与烟酰胺，结果显示，烟酸和烟酰胺峰形对称，烟酰胺与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测需求。此方法可为食品中烟酸的检测提供参考。
关键词：食品、婴幼儿配方奶粉、烟酰胺、烟酸、Shim-pack GIST C18-AQ、HPLC

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（5μm，4.6×250mm；P/N：227-30742-08）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+60L水箱 +取水器）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合对照品溶液的制备

分别取烟酸、烟酰胺对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液分别制成每1mL含1000μg烟酸、烟酰胺的中间溶液。分别取烟酸、烟酰胺中间溶液适量，加水制成每1mL含烟酸10μg、烟酰胺10μg的混合对照品溶液，即得。

1.3 供试品溶液的制备

参考GB5009.89-2016第二法样品制备中不含淀粉的食品（调制乳、调制乳粉、饮料类、固体饮料类、豆粉和豆浆粉等制品）项下制备方法：称取婴幼儿配方奶粉试样约5.0g（精确到0.01g），加入约25mL 45℃~50℃的水，称取混合均匀液体试样约20.0g（精确到0.01g）于150mL锥形瓶中，置于超声波振荡器中振荡约10min以上充分溶解，静置5min~10min，并冷却至室温。
待试样溶液降至室温后，用5.0mol/L盐酸溶液和0.1mol/L盐酸溶液调节试样溶液的pH至1.7±0.1，放置约2min后，再用5.0mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L氢氧化钠溶液调节试样溶液的pH至4.5±0.1，置于50℃水浴超声波振荡器中振荡10min以上充分提取，冷却至室温后转至100mL容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并100mL容量瓶中，用水定容至刻度后混匀，经滤纸过滤。滤液再经0.45μm微孔滤膜加压过滤，用样品瓶收集，即得。

1.4 分析条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ（5μm，4.6×250mm；P/N：227-30742-08）；
柱温：25°C
检测波长：261nm
流速：1.0mL/min
进样量：10µL
流动相：甲醇70mL、异丙醇20mL、庚烷磺酸钠1g，用910mL水溶解并混匀后,用高氯酸调pH至2.1±0.1

2 实验结果

按照上述色谱条件（1.4）进行采集，混合对照品溶液和供试品溶液色谱图如下：
混合对照品溶液:

供试品溶液:

重现性:

对照品溶液重现性

供试品溶液重现性

3. 结论

本文建立了食品（婴幼儿配方奶粉）中烟酸和烟酰胺的HPLC测定方法。参照GB5009.89-2016第二法的色谱条件，采用色谱柱Shim-pack GIST C18-AQ分析食品（婴幼儿配方奶粉）中烟酸与烟酰胺，结果显示，烟酸和烟酰胺峰形对称，烟酰胺与相邻杂质峰基线分离，满足日常检测需求。此方法可为食品中烟酸的检测提供参考。