摘要:本文建立了依托泊苷有关物质分析的HPLC测定方法。参照《中国药典》中色谱分析条件,采用色谱柱Shim-pack VP-Phenyl和Shim-pack Scepter Phenyl-120,对依托泊苷有关物质系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液进行分析,系统适用性溶液色谱图中,依托泊苷峰的保留时间约为26.593和26.307分钟,依托泊苷峰与对羟基苯甲酸丙酯峰的分离度符合要求,满足《中国药典》需求,此方法可为依托泊苷有关物质分析提供参考。
关键词:依托泊苷、有关物质、Shim-pack VP-Phenyl、Shim-pack Scepter Phenyl-120、HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD XR高效液相色谱仪;
色谱柱:Shim-pack VP-Phenyl(4.6×250mm,5μm;P/N:228-59928-92;S/N:0032032);
Shim-pack Scepter Phenyl-120(4.6×250 mm,5 μm;P/N:227-31071-06;S/N:122DB00028);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 溶液的制备
1.2.1 混合溶剂
乙腈-醋酸盐缓冲液(取醋酸钠5.44g,加水溶解并稀释至2000mL,用冰醋酸调节pH值至4.0)(30∶70)
1.2.2 系统适用性溶液
取对羟基苯甲酸丙酯适量,加混合溶剂溶解并稀释制成每1mL中约含0.2mg的溶液,取1mL,置200mL量瓶中,再精密加入供试品溶液1mL,用混合溶剂稀释至刻度,摇匀。
1.2.3 供试品溶液
取本品,加混合溶剂溶解并稀释制成每1mL中约含2mg的溶液。
1.2.4 对照溶液
供试品溶液用甲醇稀释100倍。
1.2.5 灵敏度溶液
供试品溶液稀释2000倍。
1.3 分析条件
柱温:25℃
柱流速:1.5mL/min
进样量:20µL
流动相:A:乙腈-醋酸盐缓冲液(20∶80);B:乙腈-醋酸盐缓冲液(60∶40)。
梯度程序如下:
实验结果
按照上述色谱条件(1.3)进行采集,色谱图如下:
1.3.1 色谱柱:Shim-pack VP-Phenyl(4.6×250mm,5μm;P/N:228-59928-92);
系统适用性溶液
供试品溶液
对照溶液
灵敏度溶液
1.3.2 色谱柱:Shim-pack Scepter Phenyl-120(4.6×250mm,5μm;P/N:227-31071-06);
系统适用性溶液
供试品溶液
对照溶液
灵敏度溶液
3. 结论
本文建立了依托泊苷有关物质分析的HPLC测定方法。参照《中国药典》中色谱分析条件,采用色谱柱Shim-pack VP-Phenyl和Shim-pack Scepter Phenyl-120,对依托泊苷有关物质系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液进行分析,系统适用性溶液色谱图中,依托泊苷峰的保留时间约为26.593和26.307分钟,依托泊苷峰与对羟基苯甲酸丙酯峰的分离度符合要求,满足《中国药典》需求,此方法可为依托泊苷有关物质分析提供参考。