摘要:本文建立了黄体酮有关物质分析的HPLC测定方法。参照《中国药典》中色谱分析条件,采用色谱柱SHIMSEN Ankylo C8-AQ,对黄体酮有关物质系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液进行分析,系统适用性溶液色谱图中,黄体酮峰的保留时间为12.651分钟,黄体酮峰与相对保留时间约为1.1的降解产物峰之间的分离度为4.589,大于4.0,满足《中国药典》需求,此方法可为黄体酮有关物质分析提供参考。
关键词:黄体酮 有关物质 SHIMSEN Ankylo C8-AQ HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪;
色谱柱:SHIMSEN Ankylo C8-AQ(4.6×250 mm,5 μm;P/N:380-01203-08;S/N:6AZ06766);
SHIMSEN Disc针式过滤器(P/N:380-00341);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 溶液的制备
1.2.1 系统适用性溶液
取黄体酮25 mg,置25 mL量瓶中,加0.1 mol/L氢氧化钠甲醇溶液10 mL使溶解,置60 ℃水浴中保温4小时,放冷,用1 mol/L盐酸溶液调节至中性,用甲醇稀释至刻度,摇匀。
1.2.2 供试品溶液
取本品,加甲醇溶解并稀释制成每1 mL中约含1 mg的溶液。
1.2.3 对照溶液
供试品溶液用甲醇稀释100倍。
1.2.4 灵敏度溶液
供试品溶液稀释2000倍。
1.3 分析条件
色谱柱:SHIMSEN Ankylo C8-AQ(4.6×250 mm,5 μm;P/N:380-01203-08;S/N:6AZ06766);
柱温:30 ℃
柱流速:1.0 mL/min;
检测波长:241 nm;
进样量:10 μL;
流动相:以甲醇-乙腈-水(25:35:40)为流动相。
2. 实验结果
按照上述色谱条件(1.3)进行采集,色谱图如下:
系统适用性溶液:
供试品溶液:
对照溶液:
灵敏度溶液:
3. 结论
本文建立了黄体酮有关物质分析的HPLC测定方法。参照《中国药典》中色谱分析条件,采用色谱柱SHIMSEN Ankylo C8-AQ,对黄体酮有关物质系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液、灵敏度溶液进行分析,系统适用性溶液色谱图中,黄体酮峰的保留时间为12.651分钟,黄体酮峰与相对保留时间约为1.1的降解产物峰之间的分离度为4.589,大于4.0,满足《中国药典》需求,此方法可为黄体酮有关物质分析提供参考。