摘要：建立了水产品中孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、隐色孔雀石绿的测定方法。采用岛津的InertSep Al-N固相萃取小柱对鳕鱼样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，岛津LCMS-8050串联质谱检测分析，内标法定量。对空白样品0.5 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为84.41%-113.25%，RSD为0.93-6.24%，回收率高，重现性好。该方法适用于水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的测定。
关键词：水产品 孔雀石绿 结晶紫 InertSep Al-N LC-MSMS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST C18，50×2.1 mm，2 μm（P/N：227-30001-02）；
固相萃取小柱：InertSep Al-N 1g/6mL（P/N：5010-61405）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

      UHPLC 条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18，50×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-02)
流 速：0.4 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：40 ℃
流动相： A：5 mM乙酸铵+0.1%甲酸水 B：0.1%甲酸乙腈

梯度洗脱程序如下：
质谱条件

      离子化模式：ESI，正离子扫描

      碰撞气：氩气

      雾化气：氮气 3 L/min

      接口温度： 300℃

      加热模块温度：400 ℃
 

      扫描模式：多反应监测(MRM)

      加热气：氮气 10 L/min

      干燥气：氮气 10 L/min

      DL温度：250 ℃

化合物参数见下表

1.3 样品前处理

1.3.1样品提取

称取5.0 g鳕鱼样品于50 mL离心管中，加入50 μL 100 ng/mL内标和11 mL乙腈，超声提取2 min，8000 r/min匀浆30 s，8000 r/min离心2 min，上清液转移至25mL比管中；另取一50mL离心管加入11mL乙腈，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移至前一离心管中，用玻璃棒搅碎离心管中的沉淀，涡旋混合30 s，超声提取5 min，8000 r/min离心2 min，上清液合并于25mL比色管中，乙腈定容至25mL，混匀，取5 mL待净化。流程图见下图1。

1.3.2 样品净化

       InertSep Al-N 1g/6 mL

5 mL乙腈活化，弃去流出液；5 mL待净化液上样，收集流出液；4 mL乙腈洗脱，收集流出液；45℃氮吹至1 mL左右，加乙腈定容至2 mL，混匀，过0.22 μm微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。流程图见下图2。

2. 结果及讨论

2.1 标准品的MRM色谱图

2.2 孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的LC-MS/MS检测添加回收结果

将鳕鱼空白样品进行0.5 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：加标回收率为84.41%-113.25%，RSD为0.93-6.24%。

3. 结论

参照国标GB/T19857-2005，建立了水产品中孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、隐色孔雀石绿的测定方法。采用岛津的InertSep Al-N固相萃取小柱对鳕鱼样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，岛津LCMS-8050串联质谱检测分析，内标法定量。对空白样品0.5 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为84.41%-113.25%，RSD为0.93-6.24%，回收率高，重现性好。该方法适用于水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的测定。