摘要：本研究建立了猪肉中53个兽药残留的测定方法。采用岛津InertSep HLB产品对猪肉样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品0.1 μg/kg 和10.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，0.1 μg/kg加标浓度的加标回收率为58.43%-107.42%，RSD为0.35%-13.87%；10 μg/kg加标浓度的加标回收率为54.23%-108.97%，RSD为0.30%-13.39%，回收率高，重现性好。该方法适用于猪肉中喹诺酮类、磺胺类、四环素类、硝唑类、大环内酯类、糖皮质激素类、氯霉素类、喹乙醇代谢物等8类兽药残留的测定。
关键词：InertSep HLB 多兽残 动物源性食品 LC-MSMS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST C18，100×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-04)；
固相萃取小柱：InertSep HLB 200 mg/6mL (P/N：5010-81976）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

      UHPLC 条件

1）氯霉素类和糖皮质激素类
色谱柱：Shim-pack GIST C18，100×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-04)
流 速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：40 ℃
流动相： A：水 B：甲醇

梯度洗脱程序如下：

2）其他类

色谱柱：Shim-pack GIST C18，100×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-04)
流 速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：40 ℃
流动相： A：0.1%甲酸水 B：甲醇

梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正/负离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表：

1.3 样品前处理

1.3.1样品提取

精密称取样品1.0 g于50 mL离心管中，加8 mLMcllvaine- Na2EDTA缓冲液*，涡旋1 min，超声20 min，8000 r/min离心2 min，取出上清液至于另一50 mL离心管中，向下层残渣继续加入8 mL Mcllvaine- Na2EDTA缓冲液*按上述步骤重复提取1次。合并2次上清液于50 mL离心管中，混匀，加5 mL正己烷，涡旋1 min，8000 r/min离心2 min，弃去正己烷层，下清液待净化。流程图见图1。

1.3.2 样品净化

      InertSep HLB 200 mg/6 mL

5 mL甲醇、5 mL水活化，弃去流出液；待净化液上样，弃去流出液；5 mL水、5 mL 20%甲醇水淋洗，弃去流出液；减压抽干小柱5 min；5 mL甲醇-乙酸乙酯-氨水（50：50：2）洗脱，收集流出液；将收集的洗脱液于35℃下氮吹至干，用20%甲醇水溶液定容至1 mL，涡旋混匀，8000 r/min离心2 min，取上清液过0.22 μm微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。 流程图见图2。

2. 结果及讨论

2.1 标准品的MRM色谱图

2.2 猪肉中34种兽药的LC-MS/MS检测添加回收结果

将猪肉空白样品进行0.1 μg/kg和10.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：0.1 μg/kg加标浓度的加标回收率为58.43%-107.42%，RSD为0.35%-13.87%；10 μg/kg加标浓度的加标回收率为54.23%-108.97%，RSD为0.30%-13.39%。

3. 结论

综上，本研究采用岛津的InertSep HLB产品对猪肉样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品0.1 μg/kg 和10.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示，0.1 μg/kg加标浓度的加标回收率为58.43%-107.42%，RSD为0.35%-13.87%；10 μg/kg加标浓度的加标回收率为54.23%-108.97%，RSD为0.30%-13.39%，回收率高，重现性好。该方法适用于猪肉中喹诺酮类、磺胺类、四环素类、硝唑类、大环内酯类、糖皮质激素类、氯霉素类、喹乙醇代谢物等8类兽药残留的测定。