摘要：本研究建立了中药材薏苡仁中10种真菌毒素同时测定的LS-MS/MS检测方法。参照2020版 《中国药典》通则2351中的多种真菌毒素测定法，采用岛津的SHIMSEN Styra HLB产品对薏苡仁样品进行净化，Shim-pack GISS-HP C18 [Metal free column]色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对薏苡仁空白样品进行高、中、低浓度（以黄曲霉毒素B1计，分别为0.4 ng/g、1.0 ng/g、2.0 ng/g）加标后，按照上述前处理方法处理后上机，各添加浓度平行3份样品考察回收率，结果显示，加标回收率为61.3%-97.4%，回收率高，满足药典要求。该方法可为中药材中10种真菌毒素同时测定提供参考。
关键词：SHIMSEN Styra HLB 薏苡仁 中药 真菌毒素 LC-MSMS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GISS-HP C18 [Metal free column]（100×2.1 mm，1.9 μm；P/N：227-30922-02）；
固相萃取小柱：SHIMSEN Styra HLB 60 mg/3 mL (P/N：380-00855-03）；
混标溶液：SHIMSEN 10种真菌毒素混标溶液（货号：380-03538）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

UHPLC 条件
色谱柱：Shim-pack GISS-HP C18 [Metal free column]（100×2.1 mm，1.9 μm；P/N：227-30922-02）
流 速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：50 ℃
流动相： A：0.01%甲酸水溶液 B：乙腈-甲醇（1：1）
梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正负离子同时扫描 扫描模式：多反应监测(MRM)
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 2.5 L/min
接口温度： 400℃
加热模块温度：500 ℃

扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：空气 3.0 L/min
干燥气：氮气 3.0 L/min
DL温度：150 ℃

各化合物MRM参数见下表

1.3 对照品溶液的制备

精密量取黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素 G2、赭曲霉毒素 A、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素 B1、伏马毒素 B2 及 T-2 毒素混合对照品溶液（SHIMSEN 10种真菌毒素混标溶液，货号：380-03538）适量，加50%乙腈溶液制成下表所述浓度的混标贮备溶液；再用 50%乙腈溶液稀释成下表所述浓度的系列混合对照品溶液。

1.4 样品前处理
1.4.1 样品提取

取供试品粉末约5 g（过二号筛），精密称定，精密加入70%甲醇溶液50 mL，超声处理30分钟，离心，精密量取上清液10 mL，用水稀释至20 mL，摇匀。精密量取3 mL，待净化。

1.4.2 样品净化

SHIMSEN Styra HLB 60 mg/3 mL
3 mL甲醇、3 mL水活化，弃去流出液；3 mL上述待净化液上样，直至有适量空气通过，收集流出液；3 mL甲醇洗脱，收集流出液；合并两次洗脱液，于40℃氮气缓慢吹至近干，加50％乙腈溶液定容至1 mL，用微孔滤膜（0.22 μm）滤过，取续滤液，即得。净化流程图见图1。

1.5 基质混合对照品溶液的制备

取空白基质样品5 g，同供试品溶液的制备方法处理至“40℃条件下用氮气吹至近干”，分别精密加入上述系列对照品溶液（1.3）1.0 mL，涡旋混匀，用微孔滤膜滤过（0.22 μm）滤过，取续滤液，即得。

1.6 测定法

分别精密吸取上述系列基质混合对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱-质谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5 μL，注入高效液相色谱-质谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、伏马毒素B2 及T-2毒素的浓度，计算，即得。

2. 结果及讨论

2.1混合对照品溶液色谱图

2.2薏苡仁基质混合对照品溶液色谱图

2.3标准曲线

将0.2、0.4、1.0、2.0、4.0 ng/mL系列薏苡仁基质混合对照品溶液（以黄曲霉毒素B1计）进样分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制校准曲线，结果见表4。薏苡仁基质中10种真菌毒素线性相关性良好，r均大于0.995，准确度在93.4%~108.9%之间。

2.4薏苡仁中10种真菌毒素的LC-MS/MS检测添加回收结果

对薏苡仁空白样品进行高、中、低浓度（以黄曲霉毒素B1计，分别为0.4 ng/g、1.0 ng/g、2.0 ng/g）加标后，按照上述前处理方法处理后上机，各添加浓度平行3份样品考察回收率，结果显示，加标回收率为61.3%-97.4%。

3. 结论

本研究建立了中药材薏苡仁中10种真菌毒素同时测定的LS-MS/MS检测方法。参照2020版 《中国药典》通则2351中的多种真菌毒素测定法，采用岛津的SHIMSEN Styra HLB产品对薏苡仁样品进行净化，Shim-pack GISS-HP C18 [Metal free column]色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对薏苡仁空白样品进行高、中、低浓度（以黄曲霉毒素B1计，分别为0.4 ng/g、1.0 ng/g、2.0 ng/g）加标后，按照上述前处理方法处理后上机，各添加浓度平行3份样品考察回收率，结果显示，加标回收率为61.3%-97.4%，回收率高，满足药典要求。该方法可为中药材中10种真菌毒素同时测定提供参考。