摘要：本应用建立了薏苡仁中赭曲霉毒素A的测定方法。按照2020年版《中国药典》四部中2351真菌毒素测定法中赭曲霉毒素测定法（第一法），采用岛津SHIMSEN赭曲霉毒素A免疫亲和柱产品对样品进行 净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，分析薏苡仁中的赭曲霉毒素A，回收率高，重复性好，满足《中国药典》要求，此方法可为薏苡仁中赭曲霉毒素A的测定提供参考。
关键词：薏苡仁,赭曲霉毒素A,Shim-pack GIST C18,SHIMSEN免疫亲和柱,,HPLC

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：岛津高效液相色谱仪 RF-20A；
色谱柱：Shim-pack GIST C18 （250mm×4.6mm，5μm ；P/N：227-30017-08）
免疫亲和柱：SHIMSEN 赭曲霉毒素A免疫亲和柱，3mL （P/N：380-00914）
标准品：SHIMSEN 赭曲霉毒素A溶液（P/N：380-03397）
SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341-05）
LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合对照品溶液制备

精密量取赭曲霉毒素A对照品溶液(100μg/mL)（SHIMSEN 黄曲霉毒素混标溶液，货号:380-03397）1.0mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液，精密量取贮备溶液0.25mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得2.5ng/ml的工作溶液。

1.3 分析条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18（250mm×4.6mm，5μm；P/N:227-30017-08）；
流速：1.0 mL/min；
进样量：5μL-25μL
柱温：30°C；
流动相：乙腈-2%冰乙酸水溶液=49:51
检测器及波长：荧光检测器；激发波长333nm，发射波长477nm

1.4 样品前处理

1.4.1 样品提取

称取20g 薏苡仁样品粉末（过二号筛）精密称定，置均质瓶中，加入氯化钠4g，精密加入80%甲醇溶液100mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000r/min），离心10分钟（离心速度4000r/min），精密量取上清液10mL，置于50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，离心10分钟（离心速度4000r/min），精密量取上清液10mL待净化。

1.4.2 样品净化

SHIMSEN 赭曲霉毒素A免疫亲和柱，3mL
精密量取上述上清液10mL，通过免疫亲和柱（SHIMSEN赭曲霉毒素A免疫亲和柱，货号:380-00914），流速每分钟3mL，用水20mL洗脱，弃去洗脱液，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用1.5mL甲醇洗脱，收集洗脱液，置2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液供HPLC分析。流程图见下图1。

2. 结果及讨论

2.1 色谱图

2.2 线性范围

分别吸取对照品混合工作液，5μL、1μL、15μL、20μL、25μL，注入液相色谱仪，按1.2中的分析条件进行测定，外标法定量。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如下图所示。

2.3 薏苡仁中赭曲霉毒素A的检测添加回收结果

将薏苡仁样品进行30μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下:

3. 结论

本应用建立了薏苡仁中赭曲霉毒素A的测定方法。按照2020年版《中国药典》四部中2351真菌毒素测定法中赭曲霉毒素测定法（第一法），采用岛津SHIMSEN赭曲霉毒素A免疫亲和柱产品对样品进行净化，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，分析薏苡仁中的赭曲霉毒素A，回收率高，重复性好，满足《中国药典》要求，此方法可为薏苡仁中赭曲霉毒素A的测定提供参考。