摘要：建立了牛奶中157种兽药残留同时测定的方法。采用岛津的SHIMSEN QuEChERS兽残专用产品对牛奶样品进行净化，Shim-pack GIST色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品1.0 μg/kg，5.0 μg/kg 和10.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行4份样品考察回收率和RSD，结果显示，将牛奶空白样品进行1.0 μg/L 、5.0 μg/L和10.0 μg/L浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行4份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：1.0 μg/L加标浓度的平均回收率为40.09%-119.57%，RSD为1.43%-27.16%；5.0 μg/L加标浓度的平均回收率为44.25%-108.92%，RSD为0.87%-18.47%；10.0 μg/L加标浓度的平均回收率为40.17%-113.69%，RSD为0.80%-23.35%，回收率高，重现性好。该方法适用于牛奶样品中的磺胺类、喹诺酮类、四环素类、硝基咪唑类、β-内酰胺类、氯霉素类、激素类、β-受体激动类、大环内酯类、苯并咪唑类、糖皮质激素类等22大类157种兽药残留的同时测定。
关键词：QuEChERS 多兽残 牛奶 LC-MSMS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST（100×2.1 mm，2 μm；P/N：227-30001-04)；
SHIMSEN QuEChERS多兽残专用净化包（QuEChERS Dispersive Tubes for Vet Drugs In Foods；P/N 380-00147）；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

      UHPLC 条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18，100×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-04)
流 速：0.3 mL/min
进样量：10 μL
柱 温：40 ℃
流动相：A：0.1%甲酸水+2 mM 乙酸铵 B：甲醇

梯度洗脱程序如下：

质谱条件

       离子化模式：ESI，正/负离子扫描

       碰撞气：氩气

       雾化气：氮气 3 L/min

       接口温度： 300℃

       加热模块温度：400 ℃
 

       扫描模式：多反应监测(MRM)

       加热气：氮气 10 L/min

       干燥气：氮气 10 L/min

       DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表

1.3 样品前处理

1.3.1样品提取

精密量取牛奶样品5.0 mL，加5 mL 5%甲酸乙腈涡旋混匀30 s，加入SHIMSEN QuEChERS多兽残专用提取包（5010-050123 QuEChERS Extract Tubes for Vet Drugs In Foods 50/p），涡旋混匀30 s，8000 rpm离心5 min，取 2 mL上清液待净化。流程图见下图1。

1.3.2 样品净化

将2 mL 提取液转移至SHIMSEN QuEChERS多兽残专用净化包（5010-015204 QuEChERS Dispersive Tubes for Vet Drugs In Foods 100/p）中，涡旋混合30 s，8000 rpm离心5 min，取上清液1 mL，加200 μL水涡旋混匀，室温下氮吹至近干，加10%甲醇水定容至1 mL，超声溶解，过0.22 μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。流程图见下图1。

2. 结果及讨论

2.1 标准品的MRM色谱图

2.2 牛奶中多种兽药的LC-MS/MS检测添加回收结果

将牛奶空白样品进行1.0 μg/L 、5.0 μg/L和10.0 μg/L浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行4份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：1.0 μg/L加标浓度的平均回收率为40.09%-119.57%，RSD为1.43%-27.16%；5.0 μg/L加标浓度的平均回收率为44.25%-108.92%，RSD为0.87%-18.47%；10.0 μg/L加标浓度的平均回收率为40.17%-113.69%，RSD为0.80%-23.35%。

3. 结论

综上，本方案采用岛津的SHIMSEN QuEChERS产品对猪肉样品进行净化，Shim-pack GIST色谱柱进行分离，采用岛津串联质谱LCMS-8050检测分析，建立了牛奶样品中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、硝基咪唑类、β-内酰胺类、氯霉素类、激素类、β-受体激动类、大环内酯类、苯并咪唑类、糖皮质激素类等22大类兽药残留的同时检测方法，该方法操作简单、分析速度快、重现性好，适用于牛奶中多兽药残留量的同时测定。