猪肉中β-受体激动剂残留量的测定
SGLC-LC/MS-018
摘要:参考国标GB 22286-2008,并对其方法进行优化,建立了猪肉中β-受体激动剂残留量的测定方法。采用岛津的WondaSep MCX固相萃取小柱对猪肉样品进行净化,Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离,串联质谱检测分析,内标法定量。对空白样品0.5 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行3份样品考察回收率和RSD,结果显示,0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为88.95%-96.77%,RSD为0.59%-11.80%,方法操作简单,回收率高,重现性好。该方法适用于猪肉中β-受体激动剂残留量的测定。
关键词:β-受体激动剂 猪肉 WondaSep MCX LC-MSMS
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
仪器配置:Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统;
色谱柱:Shim-pack GIST C18,50×2.1 mm,2 μm(P/N:227-30001-02);
固相萃取小柱:WondaSep MCX 60 mg/3mL(P/N:5010-81931);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 分析条件
UHPLC 条件
色谱柱:Shim-pack GIST C18,50×2.1 mm,2 μm(P/N:227-30001-02)
流 速:0.3 mL/min
进样量:5 μL
柱 温:40 ℃
流动相: A:0.1%甲酸水 B:甲醇
梯度洗脱程序如下:
质谱条件
离子化模式:ESI,正离子扫描
碰撞气:氩气
雾化气:氮气 3 L/min
接口温度:300℃
加热模块温度:400 ℃
扫描模式:多反应监测(MRM)
加热气:氮气 10 L/min
干燥气:氮气 10 L/min
DL温度:250 ℃
各化合物MRM参数见下表:
1.3 样品前处理
1.3.1样品提取
取2.0 g均质猪肉,加入20 μL 50 ng/ mL内标和8 mL 0.2 mol/L乙酸钠-乙酸缓冲液(pH=5.2),充分混匀,再加入50 μL β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,混匀后,370C 水浴水解12 h。8000 r/min 离心2 min,取出上清液,下层继续加入8 mL 0.1mol/L高氯酸溶液,振荡提取2 min,8000 r/min 离心2 min,合并2次上清液,混匀,待净化。流程图见下图。
1.3.2 样品净化
WondaSep MCX 60 mg/3 mL
3 mL甲醇、3 mL水活化;待净化液上样,弃去流出液;3 mL水、3 mL甲醇淋洗,弃去流出液;2.5 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,400C氮吹至干,0.1%甲酸水溶液定容至1 mL,混匀,用0.22 μm有机滤膜过滤,供测定。流程图见下图。
2. 结果及讨论
2.1 标准品的MRM色谱图
2.2 猪肉中β-受体激动剂的LC-MS/MS检测添加回收结果
将猪肉空白样品进行0.5 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行3份样品考察回收率和RSD,具体结果如下:0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为88.95%-96.77%,RSD为0.59%-11.80%。
3. 结论
本文参考国标GB 22286-2008,并对其方法进行优化,建立了猪肉中β-受体激动剂残留量的测定方法。采用岛津的WondaSep MCX固相萃取小柱对猪肉样品进行净化,Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离,串联质谱检测分析,内标法定量。对空白样品0.5 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行3份样品考察回收率和RSD,结果显示,0.5 μg/kg加标浓度的加标回收率为88.95%-96.77%,RSD为0.59%-11.80%,方法操作简单,回收率高,重现性好。该方法适用于猪肉中β-受体激动剂残留量的测定。