摘要：本应用参照国标GB-23200-20-2016，并对其方法优化，建立了苹果中阿维菌素、埃普利诺菌素、伊维菌素、多拉菌素药物残留的测定方法。采用岛津的InertSep Al-N产品对样品进行净化，Shim-pack GIST色谱柱进行分离，岛津串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品进行5.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，结果显示：5.0 μg/kg加标浓度的平均回收率为76.87%-86.47%，RSD为4.46%-13.68%。该方法操作简单、回收率高，重现性好，适用于苹果样品中阿维菌素类药物残留的测定。
关键词：InertSep Al-N 阿维菌素 苹果 LC-MS/MS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST C18，50×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-02)；
QuEChERS提取盐试剂包（P/N：380-00148）；
50 mL陶瓷均质子（P/N：380-00171）；
固相萃取小柱：InertSep Al-N 1 g/6 mL (P/N：5010-61405) ；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

UHPLC 条件
色谱柱：Shim-pack GIST C18，50×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-02)
流速：0.3 mL/min
进样量：5 µL
柱温：40℃
流动相： A：5 mM乙酸铵溶液 B：乙腈
梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，负离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

各化合物MRM参数见下表：

*定量离子对

1.3 样品前处理
1.3.1 样品提取

称取10g样品（精确到0.01g），于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，振摇混匀，加入QuEChERS提取盐试剂包（货号380-00148： 4g MgSO4、1g氯化钠、0.5g柠檬酸氢二钠、1g柠檬酸钠，50根离心管 & 50包试剂包/p）及陶瓷均质子1颗，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min。6000r/min下离心2 min，取上清液于旋蒸瓶中，40 ℃减压蒸至2~3mL，待净化，流程图见下图1。

图1 样品提取流程图

InertSep Al-N 1 g/6 mL
5 mL乙腈活化，弃去流出液；待净化液上样，收集流出液；5 mL70%乙腈水溶液分2次洗脱，收集流出液；合并所有流出液，加乙腈定至10 mL，混匀，过0.22 μm微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。流程图见下图2。<

图2 样品净化流程图
 

2. 结果及讨论
2.1 标准品的MRM色谱图

阿维菌素类药物标准品的MRM色谱图（2.5 ng/mL）

（1. 埃普利诺菌素 2. 阿维菌素 3. 多拉菌素 4. 伊维菌素）

将苹果空白样品分别进行5.0 μg/kg浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：5.0 μg/kg加标浓度的平均回收率为76.87%-86.47%，RSD为4.46%-13.68%。

3. 结论

综上，本方案采用岛津的InertSep Al-N产品对苹果样品进行净化，Shim-pack GIST色谱柱进行分离，采用岛津串联质谱LCMS-8050检测分析，建立了苹果样品中阿维菌素类药物残留的检测方法，该方法操作简单、回收率高、重现性好，适用于苹果样品中阿维菌素类药物残留的测定。