猪肉中五氯酚残留量的测定
SGLC-LC/MS-017
摘要:参考国标GB 23200.92-2016,建立了猪肉中五氯酚残留量的测定方法。采用岛津的WondaSep MAX固相萃取小柱对猪肉样品进行净化,Shim-pack XR-ODSⅢ色谱柱进行分离,串联质谱检测分析。对空白样品1.0 μg/kg和4.0 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行5份样品考察回收率和RSD,结果显示,1.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为77.38%-88.61%,RSD为5.52%;4.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为91.35%-96.40%,RSD为2.54%,回收率高,重现性好。该方法适用于猪肉中五氯酚残留量的测定。
关键词:五氯酚 猪肉 WondaSep MAX LC-MSMS
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
仪器配置:Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统;
色谱柱:Shim-pack XR-ODSⅢ,2.0 mm×75 mm L,1.6 μm (P/N:228-59922-92);
固相萃取小柱:WondaSep MAX 60 mg/3Ml(P/N:5010-81941);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 分析条件
UHPLC 条件
色谱柱:Shim-pack XR-ODS Ⅲ,2.0 mm×75 mm L,1.6 μm (P/N:228-59922-92)
流 速:0.3 mL/min
进样量:10 μL
柱 温:40 ℃
流动相: A:0.1%甲酸水+2 mM 甲酸铵水溶液 B:甲醇
梯度洗脱程序如下:
质谱条件
离子化模式:ESI,负离子扫描
碰撞气:氩气
雾化气:氮气 3 L/min
接口温度: 300℃
加热模块温度:400 ℃
扫描模式:多反应监测(MRM)
加热气:氮气 10 L/min
干燥气:氮气 10 L/min
DL温度:250 ℃
五氯酚MRM参数见下表
1.3 样品前处理
1.3.1样品提取
取2.0 g均质猪肉,加入6 mL 5%三乙胺的乙腈-水溶液(乙腈:水=7:3),振摇1 min,超声5 min,8000 r/min 离心5 min,收集上清液;残渣用6 mL 5%三乙胺的乙腈-水溶液(乙腈:水=7:3)按上述步骤再次提取,合并上清,混匀,待净化。流程图见下图1。
1.3.2 样品净化
WondaSep MAX 60 mg/3 mL
5 mL甲醇、5 mL水活化;待净化液上样,弃去流出液;5 mL 5%氨水溶液、5 mL甲醇、5 mL 2%甲酸的甲醇-水溶液(2%甲酸甲醇:水=1:1)淋洗,弃去流出液,真空泵抽干小柱5 min;4 mL 4%甲酸甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,用4%甲酸甲醇定容至4 mL,混匀,用0.22 μm有机滤膜过滤,供测定。流程图见下图2。
1.4 标准曲线的绘制
取空白样品,按上述1.3.1和1.3.2处理,使用空白基质配制浓度分别为0.5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L的标准样品。
2. 结果及讨论
2.1 标准品的MRM色谱图
2.2 线性范围
取空白溶液配制混合工作液,得到0.5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L不同浓度的样品,按1.2中的分析条件进行测定,外标法定量。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,如图3所示。线性方程、相关系数、线性范围见表1。
2.3 猪肉中五氯酚的LC-MS/MS检测添加回收结果
将猪肉空白样品进行1.0 μg/kg和4.0 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行5份样品考察回收率和RSD,具体结果如下:1.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为77.38%-88.61%,RSD为5.52%;4.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为91.35%-96.40%,RSD为2.54%。
3. 结论
综上,本方案采用岛津的WondaSep MAX固相萃取小柱对鸡肉样品进行净化,Shim-pack XR-ODSⅢ色谱柱进行分离,采用岛津串联质谱LCMS-8050检测分析,建立了猪肉样品中五氯酚的检测方法,该方法回收率高、重现性好,适用于猪肉样品中五氯酚的测定。