猪肉中喹诺酮类、磺胺类和四环素类兽药残留的测定
SGLC-LC/MS-011
摘要:本研究建立了猪肉中喹诺酮类、磺胺类和四环素类等34个兽药残留同时测定的方法。采用岛津的InertSep HLB产品对猪肉样品进行净化,Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离,串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品10.0 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行3份样品考察回收率和RSD,结果显示,10.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为54.66%-100.56%,RSD为0.16%-8.38%,回收率高,重现性好。该方法适用于猪肉中喹诺酮类、磺胺类和四环素类兽药残留的测定。
关键词:InertSep HLB Shim-pack GIST C18 多兽残 动物源性食品 LC-MSMS
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
仪器配置:Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统;
色谱柱:Shim-pack GIST C18(100×2.1 mm,2 μm ;P/N:227-30001-04);
固相萃取小柱:InertSep HLB 200 mg/6mL (P/N:5010-81976);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 分析条件
UHPLC 条件
色谱柱:Shim-pack GIST C18,100×2.1 mm,2 μm (P/N:227-30001-04)
流 速:0.3 mL/min
进样量:5 μL
柱 温:40 ℃
流动相: A:0.1%甲酸水 B:甲醇
梯度洗脱程序如下:
质谱条件
分析仪器: LCMS-8050
离子化模式:ESI,正离子扫描
碰撞气:氩气
雾化气:氮气 3 L/min
接口温度: 300℃
加热模块温度:400 ℃
扫描模式:多反应监测(MRM)
加热气:氮气 10 L/min
干燥气:氮气 10 L/min
DL温度:250 ℃
延迟时间: 1 ms
各化合物MRM参数见下表
1.3 样品前处理
1.3.1 样品提取
精密称取样品1.0 g于50 mL离心管中,加8 mLMcllvaine- Na2EDTA缓冲液*,涡旋1 min,超声20 min,8000 r/min离心2 min,取出上清液至于另一50 mL离心管中,向下层残渣继续加入8 mL磷酸盐缓冲液*按上述步骤重复提取1次。合并2次上清液于50 mL离心管中,混匀,加5 mL正己烷,涡旋1 min,8000 r/min离心2 min,弃去正己烷层,下清液待净化。流程图见图1。
1.3.2 样品净化
InertSep HLB 200 mg/6 mL
5 mL甲醇、5 mL水活化,弃去流出液;待净化液上样,弃去流出液;5 mL水、5 mL 20%甲醇水淋洗,弃去流出液;减压抽干小柱5 min;5 mL甲醇-乙酸乙酯-氨水(50:50:2)洗脱,收集流出液;将收集的洗脱液于35℃下氮吹至干,用20%甲醇水溶液定容至1 mL,涡旋混匀,8000 r/min离心2 min,取上清液过0.22 μm微孔滤膜,供LC-MS/MS分析。 流程图见图2。
2. 结果及讨论
2.1 标准品的MRM色谱图
2.2 猪肉中34种兽药的LC-MS/MS检测添加回收结果
将猪肉空白样品进行10.0 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行3份样品考察回收率和RSD,具体结果如下:10.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为54.66%-100.56%,RSD为0.16%-8.38%;采用W公司 HLB小柱对样品进行净化,样品加标回收率为52.35%-105.80%,RSD为0.44%-9.09%。
3. 结论
综上,本研究采用岛津的InertSep HLB产品对猪肉样品进行净化,同时采用岛津液相色谱串联质谱 LCMS-8050,岛津 Shim-pack GIST C18色谱柱进行分析,对猪肉中磺胺类、喹诺酮类、四环素类3类兽药进行检测,并和采用W公司 HLB小柱净化样品后的回收率及RSD进行对比,结果表明:该方法回收率高、重现性好,可以应对猪肉中磺胺类、喹诺酮类、四环素类的测定要求;并且回收率及RSD与W公司HLB小柱相当,InertSep HLB小柱能能完全替代W 公司 HLB小柱对猪肉中磺胺类、喹诺酮类、四环素类兽药残留进行分析。