摘要：硝基呋喃类药物是一类合成的抗菌药物。该类药物很不稳定，在动物体内迅速分解产生代谢物，代谢物在体内与细胞膜蛋白结合成结合态。由于代谢物比较稳定也有致癌作用，所以在食品安全的检测中检测硝基呋喃代谢物。常见的硝基呋喃代谢物有如下四种：3-氨基-2-恶唑酮(AOZ)、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)、1-氨基-乙内酰脲(AHD)和氨基脲(SEM)。本研究采用岛津的InertSep HLB产品对猪肉样品进行净化，同时采用岛津液相色谱串联质谱 LCMS-8050，岛津 Shim-pack GIST C18色谱柱进行分析，对猪肉中4种硝基呋喃类代谢物进行检测，结果表明：该方法回收率高、重现性好，可以应对猪肉等动物源性食品中硝基呋喃类代谢物的测定要求。
关键词：InertSep HLB Shim-pack GIST C18 硝基呋喃代谢物 猪肉
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack GIST C18（50×2.1 mm，2 μm ；P/N：227-30001-02）
固相萃取小柱：InertSep HLB 60 mg/3 mL (P/N：5010-81973) ；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件
UHPLC 条件

分析仪器： LCMS-8050
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度： 400℃
加热模块温度：450 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 15 L/min
干燥气：氮气 5 L/min
DL温度：250 ℃
喷针偏移距离：+3.00 mm
各化合物MRM参数见下表

1.3 样品前处理
1.3.1 样品提取、衍生

称取均质样品2.0 g于50 mL离心管中，加20 mL 0.2 mol/L盐酸溶液，涡旋1 min，加300 μL 0.1 mol/L 2-硝基苯甲醛衍生剂，涡旋混匀1 min，37℃恒温振荡衍生16 h。样品放置室温，加5 mL 0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液，混匀，用1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.2-7.4，8000 r/min离心2 min，取出上清液，待净化。具体步骤见图1。

1.3.2 样品净化

5 mL甲醇、5 mL水活化，弃去流出液；待净化液上样，弃去流出液；5 mL水清洗，弃去流出液；减压抽干小柱5 min；5 mL乙酸乙酯洗脱，收集流出液；将收集的洗脱液于40℃下氮吹至干，用0.01%甲酸乙腈-0.01%甲酸水溶液（1：9）定容至1 mL，供LC-MS/MS分析。

2. 结果及讨论

将猪肉空白样品进行0.5 μg/kg浓度加标，平行3份样品考察回收率和RSD；并按上述相同方法采用W公司的HLB小柱对样品进行净化，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：采用岛津InertSep HLB小柱对样品进行净化，样品加标回收率为71.26%-80.93%，RSD为4.77%-7.21%；采用W公司 HLB小柱对样品进行净化，样品加标回收率为72.45%-78.03%，RSD为8.47%-12.47%。

3. 结论

综上，本研究采用岛津的InertSep HLB产品对猪肉样品进行净化，同时采用岛津液相色谱串联质谱 LCMS-8050，岛津 Shim-pack GIST C18色谱柱进行分析，对猪肉中4种硝基呋喃类代谢物进行检测，并和采用W公司 HLB小柱净化样品后的回收率及RSD进行对比，结果表明：该方法回收率高、重现性好，可以应对猪肉中4种硝基呋喃类代谢物的测定要求；回收率和W公司HLB相当，但上样时小柱流速比W公司 HLB小柱快，重现性比W公司 HLB小柱高，可以为分析检测人员节省时间，并提供可靠的实验数据。