摘要:本文建立了柴胡的测定方法。结果表明,采用色谱柱Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm)分析柴胡,柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的分离度及其理论塔板数均满足《中国药典》要求。此方法可为柴胡的检测提供参考。
关键词:柴胡 Shim-pack VP-ODS HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪;
色谱柱:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm;P/N:228-34937-92);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 分析条件
色谱柱:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm)
流动相:乙腈-水
柱温:40 ℃
检测波长:210 nm
流速:1.0 mL/min
进样量:20 μL(标准品)、10 μL(供试品)
梯度洗脱程序
1.3 对照品溶液的制备
取柴胡皂苷a对照品、胡皂苷d对照品适量,精密称定,加甲醇制成每l mL含胡皂苷a 0.4 mg、胡皂苷d 0.5 mg的溶液,摇匀,即得。
1.4 供试品溶液的制备
取本品粉末(过四号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25 mL,密塞,30℃水温超声处理(功率200W,频率40kHz)30分钟,滤过,用甲醇20 mL分2次洗涤容器及药渣,洗液与滤液合并,回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解,转移至5 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2. 结果讨论
2.1 色谱图
按照上述色谱条件(1.2)进行采集,对照品溶液色谱图和样品色谱图如下:
柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品溶液:
供试品溶液:
2.2 重现性
柴胡皂苷a的重复性: 柴胡皂苷d的重复性:
3. 结论
本文建立了柴胡的测定方法。结果表明,采用色谱柱Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm)分析柴胡,柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的分离度及其理论塔板数均满足《中国药典》要求,重复性良好。此方法可为柴胡的检测提供参考。