摘要：本文建立了维生素D3代谢物衍生物25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、25(OH)D3-PTAD（6S-isomer）及C3-差向异构体-维生素D3代谢物衍生物3-epi-25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、3-epi-25(OH)D3-PTAD（6S-isomer）等4个化合物的LC-MS/MS测定方法。结果表明，采用色谱柱Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50 mm，1.8 μm )分析25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、25(OH)D3-PTAD（6S-isomer）、3-epi-25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、3-epi-25(OH)D3-PTAD（6S-isomer），4个同分异构体能实现很好的分离，此方法可为血清中维生素D3的检测提供参考。
关键词：维生素D3 Shim-pack Velox Biphenyl LC-MS/MS
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统；
色谱柱：Shim-pack Velox Biphenyl（2.1×50mm，1.8μm；P/N：227-32013-02；S/N：1610319 )；
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 混合溶液的制备

取客户提供的4个衍生物母液适量，加甲醇稀释至如下浓度：25（OH）D3-PTAD（6R-isomer）、25（OH）D3-PTAD（6S-isomer）为5.3747 nmol/L；3-epi-25（OH）D3-PTAD（6R-isomer）、3-epi-25（OH）D3-PTAD（6S-isomer）为3.8467 nmol/L。

1.3 分析条件

UHPLC 条件
色谱柱：Shim-pack Velox Biphenyl（2.1×50mm，1.8μm；P/N：227-32013-02；S/N：1610319 )
流速：0.3 mL/min
进样量：5 µL
柱温：30℃
流动相： A：0.1%甲酸水溶液 B：0.1%甲酸甲醇溶液
梯度洗脱程序如下：

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
碰撞气：氩气
雾化气：氮气 3 L/min
接口温度：300℃
加热模块温度：400 ℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
加热气：氮气 10 L/min
干燥气：氮气 10 L/min
DL温度：250 ℃

4个化合物MRM参数见下表

2. 结果及讨论

按照上述色谱条件（1.3）进行采集，4个化合物混合溶液色谱图如下：

4个化合物重现性

3. 结论

本文建立了维生素D3代谢物衍生物25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、25(OH)D3-PTAD（6S-isomer）及C3-差向异构体-维生素D3代谢物衍生物3-epi-25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、3-epi-25(OH)D3-PTAD（6S-isomer）等4个化合物的LC-MS/MS测定方法。结果表明，采用色谱柱Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50 mm，1.8 μm )分析25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、25(OH)D3-PTAD（6S-isomer）、3-epi-25(OH)D3-PTAD（6R-isomer）、3-epi-25(OH)D3-PTAD（6S-isomer），4个同分异构体能实现很好的分离，此方法可为血清中维生素D3的检测提供参考。