对甲苯磺酸作为一种有机强酸，常被用于与有机碱类药物成盐，增加其水溶性。然而，由于合成工艺中醇类溶剂的广泛应用，使其极易与残留醇类生成对甲苯磺酸酯。其中，对甲苯磺酸甲酯(PTSM)和对甲苯磺酸乙酯(PTSE)已被证明具有基因毒性。

按照欧洲医药评价署（EMEA）的要求，必须对药物和药品中任何可能存在、未在早期合成步骤中予以清除的所有基因毒性杂质进行检测，确保其含量低于1.5μg/d的毒理学关注阈（TTC），这对于检测方法的灵敏度是一个极大的挑战，是当前原料药质量研究和过程控制中的难点之一。目前，针对磺酸酯类杂质的检测，较为成熟的方法有欧洲药典中收载的GC-MS衍生法,但该法存在以下局限：1.采用的衍生化策略增加了操作难度和工作量；2.衍生的产物-碘代烷烃见光易分解，稳定性差，不便样品的大批量测定；3.受检测方法原理的限制，API或基质中存在的甲酯和乙酯可以参与衍生反应，导致严重的假阳性结果。

由于上述原因，我们推出了基于LC-MS/MS系统的检测方法，用于对甲苯磺酸甲酯-乙酯的检测。该方法具有无需衍生、灵敏度高、分析时间短等优点，可以用于原料药及制剂产品中对甲苯磺酸酯类杂质的常规检测放行。

【实验部分】

2.1 试剂

乙腈：HPLC级；氨水：HPLC级；超纯水。

2.2 仪器

超高效液相色谱及串联质谱联用仪

2.3 色谱条件 

【结果与讨论】

3.1 色谱柱的选择

由于本方法所需的流动相pH值较高，我们筛选了不同厂家的高pH值耐受性色谱柱。如图1所示, 岛津有机杂化硅胶填料的色谱柱（Shim-pack Scepter-HD-C18）在高pH值下的耐受性和柱效均更优。

▲图1  不同厂家耐碱色谱柱柱性能对比图

3.2 重复性

取对照溶液重复6次进样，结果(见图2)表明本方法重现性和精密度良好。

▲图2  对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照溶液图

3.3 灵敏度

如图3所示，通过推算，可以得知该方法的检测限和定量限约为0.1ng/mL和0.2ng/mL，灵敏度极高。

▲图3  1ng/mL对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯色谱图

3.4 线性

如图4所示，1~100ng/ml浓度的对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯线性拟合结果R2= 1.00，结果优异。

▲图4  对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯标准曲线

3.5 准确度

在原料药溶液中，分别加入5ng/mL、25ng/mL、100ng/mL的对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯进行加标回收率实验，各加标浓度的回收率在88-94%之间。

综上所述，本方法的准确度和精密度良好、工作曲线相关性优异、灵敏度高、抗干扰能力强、操作简便且适用范围广，可以作为原料药/制剂中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯含量测定的优选解决方案，尤其适用于限度低和基质条件复杂的情况。

作者：谢璟雯，

上海熙华医药科技有限公司，上海应用技术大学学士，2020年6月加入熙华医药，从事分析方法开发及验证工作。