摘要:本文建立了蟾酥特征图谱及含量测定的HPLC方法。参照2020版《中国药典》蟾酥含量测定项下的色谱条件,采用色谱柱Shim-pack VP-ODS(4.6×250mm,5μm),对蟾酥对照药材进行分析,结果显示以华蟾酥毒基为参照峰,蟾毒灵和脂蟾毒配基的相对保留时间均在规定值的±5%范围内;特征图谱应出现的5个特征峰均有呈现,且峰形和重现性良好;且华蟾基毒素与相邻杂质能达到基线分离,满足药典要求。此方法可为蟾酥含量测定及特征图谱的测定提供参考。
关键词:蟾酥 含量测定 特征图谱 Shim-pack VP-ODS HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
Shimadzu LC-20AD高效液相色谱仪;
色谱柱:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm;P/N:228-34937-92;S/N:9052614);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 参照物溶液的制备
取蟾酥对照药材25 mg,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20 mL,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
1.3 分析条件
色谱柱:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm;P/N:227-34937-92;S/N:9052614)
柱温:30℃
检测波长:296 nm
流速:0.6 mL/min
进样量:10 μL
流动相:A:0.3%乙酸溶液 B:乙腈
2. 结果
按照上述色谱条件(1.3)进行采集,色谱图如下:
参照物溶液:
重现性
3. 结论
本文建立了蟾酥特征图谱及含量测定的HPLC方法。参照2020版《中国药典》蟾酥含量测定项下的色谱条件,采用色谱柱Shim-pack VP-ODS(4.6×250mm,5μm),对蟾酥对照药材进行分析,结果显示以华蟾酥毒基为参照峰,蟾毒灵和脂蟾毒配基的相对保留时间均在规定值的±5%范围内;特征图谱应出现的5个特征峰均有呈现,且峰形和重现性良好。此方法可为蟾酥含量测定及特征图谱的测定提供参考。